植物样品膜脂中脂肪酸含量测定_39457

发布时间:2023-01-09

原理

膜脂主要包括磷脂和糖脂。样品经高温处理以除去水分并使脂酶钝化,用氯仿-甲醇溶液研磨抽提总脂,再用石油醚反复冲洗去除中性脂,得到膜的极性脂,碱性条件下膜脂与甲醇反应产生高级脂肪酸甲酯。

获得的高级脂肪酸甲酯注入气相色谱柱,通过汽化室汽化后被载气带入分离柱,根据各组分在分离柱中保留时间不同而被分离。用标准脂肪酸的保留时间(所谓的保留时间Rt:理论上是指样品在分离柱中运行所用的时间,实际中是以加样为起始零时间,物质到达检测器达到浓度最大时为终止时间,从起始零时间到终止时间为保留时间)定性各组分。用面积归一法(所谓面积归一法是将各组分色谱峰的总面积之和视100,各组分的峰面积在其中所占的百分比为各组分的相对值的定量方法)定量计算各种

脂肪酸

含量。

仪器设备

1)气相色谱仪 (2) 色谱工作站或积分仪


3)LKB油脂快速提取仪 (4) 烘箱


5)分液漏斗 (6)1mL移液管


7)10mL带塞刻度试管 (8)60目的筛

9)100 mL量筒

试剂

(1).氯仿-甲醇溶液1:2(体积比) (2).氯仿
(3).0.76%NaCl溶液 (4)甲醇饱和的石油醚溶液
(5).石油醚-苯溶液:将一份石油醚(30-60℃沸程)与等体积的苯混合(体积比)即可。
(6).0.4 mol·L-1 KOH-甲醇溶液:称取22.4g KOH溶于甲醇中,并定容至1000mL。
(7).无水乙醇。
(8).脂肪酸标样:棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸和花生酸等。

方法步骤

1.总脂的抽提

(1).取适量植物样品,100℃烘3060 min,以便除去水分和钝化脂酶。取出样品冷却至室温,粉碎后过60目的筛,称过筛后的样品5g放入滤纸筒.在上面覆盖一层脱脂棉,装入LKB油脂快速提取仪的样品室,浸泡于约60 mL氯仿-甲醇提取液中,开循环冷却水室温过夜或 10h。

(2).打开加热开关并调节温度旋钮,使提取液处于微沸状态,维持1 h后关闭加热开关。

(3).打开提取仪样品室的旋钮,使提取液流入蒸馏瓶(预先加几粒玻璃珠),打开回流加热开关.调节温度调节旋钮,蒸馏蒸馏瓶中的提取液,并使冷却后的液体流过样品室再回到蒸馏瓶中,如此回流提取1 h,关闭加热开关。目的是淸洗样品室壁和滤纸筒中黏附的残留脂。

(4).关闭提取仪旋钮,取出滤纸筒。

(5).打开回流加热开关,再将蒸馏瓶中的样品蒸发至只含少量提取液,关闭加热开关。

(6).再将蒸馏瓶取下于100℃烘烤1 h,烘干提取液获得总脂。

2.膜脂的抽提

将获得的总脂溶于甲醇饱和的石油醚溶液中,充分振荡,静置分层后,回收下层甲醇溶液。如此重复

23次,最后浓缩甲醇溶液获得膜脂。

3.膜脂脂肪酸的甲酯化

(1).取膜脂0.1 mg于10 mL 具塞试管中,加1mL石油醚-苯混合液使之溶解,再加 0.4 molL-1 KOH-甲醇溶液1mL, 充分振荡后室溫反应2060 min(夏季20 min,冬季 60 min) 。

(2).加入蒸馏水使上层有机相至约10 mL刻度处,再充分混匀后静置,直至溶液分为清晰可辨的上下两层。

(3).如果有机相混浊,加入23滴无水乙醇,静置片刻,待用。

4. 称取标样

0. 1 mg,分别溶于1mL 的苯:石油醚=1 : 1(体积比)中,0.4molL

-1

KOH-甲醇溶液甲基化30 min.重复3(2)3(3)步骤

5.仪器条件

(1).柱型:6%10%DEGS(聚二乙二醇丁二酸酯),101白色硅烷化担体(酸洗)。

(2).温度:液化室250 ℃,柱温195℃,检测器250℃。

(3).气体流速:载气(N2

)流速,

30 mLmin-1


H2 流速,40 mLmin-1;


空气流速,

30 mLmin-1.

(4).信号调节:1×102

1×10.。

6.进样

(1).用微量进样器吸取标样上层有机相各1μL进样,同时启动色谱工作站记录色谱峰和相关数据(主要为Rt和峰面积),记为Rt0.

(2).用微量进样器吸取样品1μL进样,同时启动色谱工作站记录色谱峰和相关数据,记为Rtx

7.结果计算

(1).定性(标准物质定性法):通过样品与标准的保留时间和峰面积进行比较,确定样品中HFA(高级脂肪酸)的类型。当样品中某峰的Rtx

植物样品膜脂中脂肪酸含量测定_39457

Rt0

相同,则样品中此峰便与

Rt0

所对应的

HFA为同一HFA。

(2).定量(面积归一法)。

式中,

Pi

:某脂肪酸的百分含量;

A1

A2

A3···An

:各脂肪酸的峰面积;

Ai

:被测脂肪酸的峰面积。可以由色谱工作站或积分仪自动给出。

注意事项

(1).步骤1(1)将过筛后的样品放入滤纸筒后,在上面一定要覆盖一层脱脂棉,但不能太厚。。
(2).步骤1(2)打开加热开关注意调节温度旋钮,一定要使提取液保持微沸状态,切忌温度不能太高。
(3).保证被分析的样品清亮。

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胚胎着床只是怀孕的第一步,还有很长的路要走,一定不能掉以轻心。想要安稳地度过孕期,应该做到以下几点:
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